Acclaim液相色譜柱如何正確使用緩沖鹽

更新時(shí)間：2021-09-26

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　　Acclaim液相色譜柱的柱長及內(nèi)徑的選擇原則是什么？長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時(shí)間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。

　　內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時(shí)，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會(huì)導(dǎo)致色譜峰畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好。因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要準(zhǔn)確分離，必須使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子，目前實(shí)驗(yàn)室使用常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。

　　分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。Acclaim液相色譜柱內(nèi)徑有2.1、3.0、4.6、10mm可供選擇，不銹鋼材質(zhì)不易因?yàn)榭呐鰮p壞柱管。

　　正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：

　　1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動(dòng)相以1、0ml/min流速?zèng)_洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過渡流動(dòng)相以0、2ml/min流速?zèng)_洗色譜柱過夜。

　　2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前，用與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1、0ml/min流速?zèng)_洗60min，再用該過渡流動(dòng)相以1、0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。

　　3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法：

　　a、用甲醇/20/80以1、0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min

　　b、用甲醇/水=20/80以0、2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。